自動(dòng)生物熒光成像系統(tǒng)是一種廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)研究、病理學(xué)檢測(cè)和藥物開發(fā)等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。其基本原理是利用生物樣品內(nèi)的熒光分子或熒光標(biāo)記物,在特定激發(fā)光源的照射下,產(chǎn)生可被檢測(cè)的熒光信號(hào),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的定量或定性分析。以下是其技術(shù)原理及其工作流程。
一、成像系統(tǒng)的核心組成
1、激光源或光源:提供特定波長(zhǎng)的光源,通常使用激光、氙燈或LED燈作為激發(fā)源。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需求,激光的波長(zhǎng)可以精準(zhǔn)調(diào)節(jié),以激發(fā)不同類型的熒光染料或蛋白質(zhì)。
2、濾光片和分光系統(tǒng):濾光片用于選擇激發(fā)光和發(fā)射光的波長(zhǎng)范圍。系統(tǒng)包括激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片兩部分。激發(fā)濾光片選擇合適的激發(fā)光波長(zhǎng),而發(fā)射濾光片則用于選擇通過樣品后發(fā)射的光波長(zhǎng)范圍。
3、光學(xué)系統(tǒng):通常包括物鏡、透鏡和其他光學(xué)元件。物鏡負(fù)責(zé)將樣品圖像放大并聚焦到相機(jī)的傳感器上。光學(xué)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)對(duì)于成像的分辨率、光學(xué)清晰度和光學(xué)效率至關(guān)重要。
4、探測(cè)器:常見的探測(cè)器包括冷卻的CCD(電荷耦合器件)或EMCCD(電子倍增CCD)相機(jī),或高靈敏度的CMOS傳感器。探測(cè)器的主要功能是接收從樣品發(fā)射出的熒光信號(hào),并將其轉(zhuǎn)換為數(shù)字圖像信號(hào)。
5、計(jì)算機(jī)和圖像處理軟件:圖像采集后,通過計(jì)算機(jī)中的圖像處理軟件對(duì)圖像進(jìn)行處理、分析和存儲(chǔ)。通常配有自動(dòng)化軟件,可以自動(dòng)執(zhí)行圖像采集、樣品掃描、數(shù)據(jù)分析以及結(jié)果展示等任務(wù)。軟件還可以對(duì)圖像進(jìn)行定量分析,提取熒光強(qiáng)度、形態(tài)特征、熒光分布等信息。

二、自動(dòng)化成像過程
自動(dòng)生物熒光成像系統(tǒng)的一大特點(diǎn)是其高度自動(dòng)化。在實(shí)驗(yàn)過程中,能夠根據(jù)預(yù)設(shè)的程序和樣品特點(diǎn),自動(dòng)完成圖像的采集、處理和分析,減少了人工操作的繁瑣,提高了實(shí)驗(yàn)效率和精確性。
1、樣品準(zhǔn)備與放置:生物樣品通常需要在玻片或培養(yǎng)皿上進(jìn)行準(zhǔn)備,并通過顯微鏡平臺(tái)進(jìn)行固定。通常配有樣品自動(dòng)加載和定位功能,通過機(jī)械手臂或自動(dòng)平臺(tái)將樣品放置在顯微鏡下。
2、自動(dòng)掃描:通過自動(dòng)控制平臺(tái)和鏡頭,實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的自動(dòng)掃描。用戶可以設(shè)定掃描區(qū)域、圖像分辨率、采集時(shí)間等參數(shù),它則自動(dòng)完成圖像的采集過程。常見的自動(dòng)化掃描模式包括平面掃描、層析掃描(Z軸掃描)等。
3、圖像處理與分析:采集到的熒光圖像會(huì)進(jìn)行圖像處理,去除噪聲、增強(qiáng)對(duì)比度,并進(jìn)行熒光信號(hào)的定量分析。常見的分析內(nèi)容包括熒光強(qiáng)度、熒光分布、標(biāo)記物的定位等。軟件能夠自動(dòng)提取區(qū)域感興趣的部分進(jìn)行進(jìn)一步分析,從而獲取更加精確的數(shù)據(jù)。
自動(dòng)生物熒光成像系統(tǒng)的技術(shù)原理基于熒光現(xiàn)象,通過特定的激發(fā)光源激發(fā)樣品中的熒光分子,使其發(fā)射出可檢測(cè)的熒光信號(hào)。系統(tǒng)利用高靈敏度的探測(cè)器和精確的光學(xué)設(shè)備,將熒光信號(hào)轉(zhuǎn)化為圖像數(shù)據(jù),通過自動(dòng)化軟件進(jìn)行分析。